一、無菌操作的重要性

 

　　無菌操作是確保細(xì)胞健康生長的關(guān)鍵。培養(yǎng)基中一旦混入微生物或細(xì)菌，就會(huì)與細(xì)胞爭奪營養(yǎng)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。此外，微生物的代謝產(chǎn)物也可能會(huì)對細(xì)胞產(chǎn)生毒害作用，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，無菌操作對于細(xì)胞培養(yǎng)來說是不可少的。

 

　　二、無菌操作技術(shù)要點(diǎn)

 

　　1.操作前準(zhǔn)備：在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)前，需確保操作臺(tái)面清潔干燥，并使用75%酒精擦拭臺(tái)面。操作者應(yīng)穿戴無菌服、口罩和手套，并確保頭發(fā)、皮膚等處無裸露。

 

　　2.器具滅菌：細(xì)胞培養(yǎng)所用的所有器具，包括培養(yǎng)瓶、吸管、離心管等，都需要進(jìn)行嚴(yán)格滅菌。通常采用高壓蒸汽滅菌法，滅菌時(shí)間及溫度需根據(jù)器具的材質(zhì)和用途進(jìn)行選擇。

 

　　3.操作過程：在操作過程中，盡量避免空氣流動(dòng)和人員走動(dòng)，減少外界污染的可能性。同時(shí)，盡量減少打開瓶蓋的時(shí)間和次數(shù)，防止空氣中的微生物進(jìn)入培養(yǎng)基。

 

　　4.培養(yǎng)環(huán)境：細(xì)胞培養(yǎng)需要在無菌環(huán)境中進(jìn)行，因此需設(shè)置無菌操作室。無菌操作室需定期進(jìn)行空氣凈化、消毒滅菌等處理，確保室內(nèi)空氣潔凈度符合要求。

 

　　三、污染防治措施

 

　　1.定期檢查：定期進(jìn)行檢查，觀察是否有微生物生長。一旦發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)及時(shí)采取措施處理，防止污染擴(kuò)大。

 

　　2.器具清潔：每次使用過的器具需及時(shí)清洗干凈，并進(jìn)行高壓蒸汽滅菌處理。對于一些容易殘留的培養(yǎng)基或細(xì)胞碎片的器具，需用清洗液反復(fù)沖洗干凈。

 

　　3.細(xì)胞保存：對于不立即使用的細(xì)胞，應(yīng)妥善保存于液氮或-80℃冰箱中。在保存和復(fù)蘇過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，防止污染發(fā)生。

 

　　4.人員培訓(xùn)：對從事細(xì)胞培養(yǎng)的工作人員進(jìn)行定期培訓(xùn)，提高其無菌意識(shí)和操作技能。通過培訓(xùn)，使工作人員充分認(rèn)識(shí)到無菌操作的重要性，并熟練掌握無菌操作技術(shù)。

 

　　5.質(zhì)量控制：建立嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系，對細(xì)胞培養(yǎng)過程中的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行監(jiān)控。對于不符合要求的操作或結(jié)果，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行調(diào)整或重新實(shí)驗(yàn)。